Paolo Ruffini, nato a Livorno nel 1978, ha debuttato in tv nel 2002, vincendo il concorso Cercasi VJ su MTV e ha condotto programmi come MTV Select, MTV On the Beach, MTV Club Generation, MTV Mobile Chart e Hitlist Italia, dal 2002 al 2004.
Nel 2005 ha iniziato la collaborazione con Marco Giusti, partecipando al talk demenziale Bla Bla Bla su Rai 2 e diventando autore e co-conduttore del programma sul cinema di genere Stracult.
Dal 2006 al 2007 è inviato speciale per Matinée e Soirée, programmi di Rai 2, oltre a partecipare alla seconda edizione di Stracult.
Nel 2007 è approdato su Comedy Central, conducendo Amici miei, un contenitore di candid camera e sketch comici.
A partire dal 2011 ha condotto diverse edizioni di Colorado su Italia 1, fino al 2019, spesso affiancato da Belen Rodríguez.
Nel 2012 ha presentato Colorado – ‘Sto classico! e alcune nuove versioni di Stracult tra cui Stracult – Speciale Venezia e Stracult – A casa di Marco Giusti su Rai 2.
Nel 2013 ha condotto il programma speciale 2013 – Un anno da paura su Rai 2 e l’edizione dei David di Donatello su Rai Movie/Rai 1.
Tra il 2016 e il 2017 è stato giudice nella trasmissione Eccezionale veramente su LA7 e ha presentato il Premio Persefone su Rete 4 nel 2017-2018.
Dal 2018 al 2020 ha curato e condotto Up & Down su Italia 1, spettacolo comico con la Compagnia Mayor Von Frinzius, affiancato da attori con sindrome di Down.
Nel 2020 ha condotto La pupa e il secchione e viceversa su Italia 1 e nel 2021 ha guidato il Paolo Ruffini Diversity Show su Comedy Central. Nel 2022 è stato concorrente in Alessandro Borghese – Celebrity Chef su TV8.
Nel 2025, conduce Zelig On su Italia 1.